细粒棘球绦虫重组双歧杆菌-Eg95疫苗诱导小鼠抗感染的保护性免疫作用

摘要：目的 探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95疫苗免疫小鼠后对Eg原头节攻击感染的保护性免疫作用.方法 雌性BALB/c小鼠56只,12 ～ 14周龄,体质量20 ～ 25 g.将重组Bb-Eg95疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小鼠,同时设有空载体、Bb和液体培养基(MRS)对照组,每组8只.免疫后8周,用Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算减蚴率；取血,分离血清,常规酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清免疫球蛋白IgG及其亚类和IgE水平；取脾,分离脾细胞,采用细胞培养的方法,在脾细胞悬液中分别加入Eg粗抗原(EgAg)和刀豆素A(ConA),四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测脾淋巴细胞增殖反应.组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 小鼠体内细粒棘球蚴质量组间比较差异有统计学意义(F=11.062,P＜ 0.05).其中皮下注射组、肌肉注射组、鼻腔接种组和口服灌胃组细粒棘球蚴质量[(0.050±0.013)、(0.050±0.019)、(0.028±0.016)、(0.031±0.018)g]明显低于MRS对照组[(0.075±0.019)g,P均＜0.01],鼻腔接种组和口服灌胃组细粒棘球蚴质量明显低于皮下注射组和肌肉注射组(P均＜ 0.05)；减蚴率的高低与小鼠体内细粒棘球蚴质量变化成反比.小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3、IgE水平(吸光度,A),组间比较差异有统计学意义(F=21.774、36.977、27.071、14.746、10.131、9.444,P＜ 0.05或P＜0.01).其中血清IgG、IgG2a和IgG2b水平皮下注射组(0.022±0.004、0.007±0.002、0.008±0.002)、肌肉注射组(0.023±0.003、0.008±0.002、0,007±0.002)、鼻腔接种组(0.032±0.007、0.012±0.002、0.013±0.004)和口服灌胃组(0.028±0.006、0.010±0.003、0.010±0.002)均显著高于MRS对照组(0.015±0.002、0.002±0.001、0.003±0.001,P均＜0.01),鼻腔接种组和口服灌胃组高于皮下注射组和肌肉注射组(P＜ 0.05或P＜0.01)；小鼠血清IgGl、IgG3和IgE水平,皮下注射组(0.004±0.001、0.003±0.002、0.004±0.002)、肌肉注射组(0.004±0.001、0.004±0.001、0.004±0.002)、鼻腔接种组(0.005±0.002、0.005±0.003、0.005±0.002)和口服灌胃组(0.005±0.001、0.004±0.002、0.004±0.003)均显著低于MRS对照组(0.009±0.001、0.009±0.002、0.009±0.001,P均＜0.01).小鼠脾淋巴细胞增殖水平在脾细胞悬液、脾细胞悬液+ EgAg、脾细胞悬液+ConA时,组间比较差异有统计学意义(F=63.975、359.833、167.399,P均＜0.01),组内组间比较差异有统计学意义(F=6741.955、4953.667、869.320、201.235、175.413、139.653、169.994,P均＜0.01),其中在加入EgAg或ConA时,脾淋巴细胞增殖水平明显高于单纯脾细胞悬液,而且加入ConA高于EgAg(P均＜0.01).结论 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95疫苗免疫小鼠,能有效的诱导小鼠产生保护性的免疫作用.