期刊简介
中华医学会、哈尔滨医科大学主办。本刊主要报道克山病、大骨节病、碘缺乏病、地方性氟、砷中毒、鼠疫、布鲁杆菌病、寄生虫等疾病的研究成果。主要栏目：述评、综述、专家论坛、论著、现场调查、临床医学、检测方法、卫生管理、学术争鸣、防治经验等。《中国地方病学杂志》被美国《化学文摘》、荷兰《医学文摘》、美国《剑桥科学文摘》和波兰《哥伯尼索引》收录;是中国自然科学、中国生物医学核心期刊，预防医学、卫生学类核心期刊。2008年获中华医学会优秀期刊二等奖，2010年获中华医学会优秀期刊奖。
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首页>中华地方病学杂志
- 杂志名称：中华地方病学杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中华医学会,哈尔滨医科大学
- 国际刊号：2095-4255
- 国内刊号：23-1583/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：2000年获黑龙江优秀科技期刊奖期刊收录：JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 医学文摘, 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 农业与生物科学研究中心文摘, 维普收录(中)
猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)中的表达、纯化和兔抗血清的制备
周必英；周泠；刘美辰；刘晖；贺莉芳
关键词：猪带绦虫, TSO45W-4B-TSOL18编码基因, 重组融合蛋白, 抗血清
摘要：目的 构建猪带绦虫pGEX-TSO45W-4B-TSOL18重组质粒,纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清.方法 用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser)3连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因.将融合基因定向克隆到pGEX-1 λT表达载体上,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18,再用重组质粒转化大肠埃希菌(E.col) ArcticExpress (DE3).用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达情况,亲和层析纯化获得重组融合蛋白.用纯化的重组蛋白按0.5 mg/只与弗氏完全佐剂(CFA)混合,于兔后腿肌肉及背部皮下多点免疫注射;2周后再用相同剂量的重组蛋白与弗氏不完全佐剂(IFA)混合加强免疫,此后每隔10 d按第2次免疫法重复加强免疫,第4次免疫后6d,采集兔心脏血并分离血清,立即纯化及制备抗血清.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗血清的效价,采用蛋白印迹(Western blot)法鉴定抗血清的特异性.结果 全基因合成的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段长度为789 bp.酶切证实pGEX-TSO45W-4B-TSOL18重组质粒成功构建,测序结果获得的基因片段大小为789 bp,与预期大小相符.SDS-PAGE分析和亲和层析后显示,重组质粒在转化E.col ArcticExpress(DE3)后,获得了相对分子质量约为55×103的重组融合蛋白,纯度为85％.ELISA测定兔抗血清的效价为1∶512 000,Western blot证实抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应,在相对分子质量约为55×103处出现1条与预期大小一致的特异性条带.结论 成功地构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18及制备了高纯度的TSO45W-4B-TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清.
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