期刊简介
中华医学会、哈尔滨医科大学主办。本刊主要报道克山病、大骨节病、碘缺乏病、地方性氟、砷中毒、鼠疫、布鲁杆菌病、寄生虫等疾病的研究成果。主要栏目：述评、综述、专家论坛、论著、现场调查、临床医学、检测方法、卫生管理、学术争鸣、防治经验等。《中国地方病学杂志》被美国《化学文摘》、荷兰《医学文摘》、美国《剑桥科学文摘》和波兰《哥伯尼索引》收录;是中国自然科学、中国生物医学核心期刊，预防医学、卫生学类核心期刊。2008年获中华医学会优秀期刊二等奖，2010年获中华医学会优秀期刊奖。
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首页>中华地方病学杂志
- 杂志名称：中华地方病学杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中华医学会,哈尔滨医科大学
- 国际刊号：2095-4255
- 国内刊号：23-1583/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：2000年获黑龙江优秀科技期刊奖期刊收录：JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 医学文摘, 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 农业与生物科学研究中心文摘, 维普收录(中)
布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9免疫原性检测
范金明；王发兴；张波；江玲；李蓓
关键词：布鲁杆菌, Ⅳ型分泌系统, 免疫原性, 疫苗
摘要：目的 检测布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9的免疫原性,寻找潜在的、新的布鲁杆菌亚单位疫苗靶标.方法 采用双酶切的方法,将布鲁埃希菌VirB9基因全长克隆至原核表达载体pET32a上,将克隆后载有VirB9基因的pET32a质粒转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导重组VirB9蛋白在大肠埃希菌中的表达.利用重组VirB9蛋白所携带的His标签,通过Ni-NAT层析,纯化在大肠杆菌中重组表达的VirB9蛋白,再通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒对纯化的蛋白进行纯度及浓度检测.用布鲁杆菌疫苗株S19株免疫BAL B/c小鼠,并以磷酸盐缓冲液(PBS)为对照.在免疫4周后,鼠尾取血,血清虎红平板凝集试验、试管凝集试验检查小鼠血清抗体；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测S19株免疫小鼠体内抗VirB9抗体滴度.在免疫后第35天,取小鼠脾脏,分离脾细胞,利用Elispot技术,检测VirB9蛋白体外再刺激后分泌细胞因子(干扰素-γ,IFN-γ)的脾细胞数,酶联斑点图像仪计数斑点,每个斑点代表1个抗原特异性T淋巴细胞,分析VirB9刺激机体产生细胞免疫反应的情况.结果 通过酶切克隆的方法成功地将VirB9全长基因741 bp克隆至pET32a载体上.SDS-PAGE显示,VirB9蛋白的相对分子质量约43×103,纯度超过97％；BCA法检测,蛋白浓度为1.6 g/L.免疫组小鼠血清虎红平板凝集试验阳性,试管凝集试验小鼠血清抗体滴度＞ 1∶800;对照组小鼠血清虎红平板凝集试验阴性,试管凝集试验小鼠血清抗体滴度阴性.免疫组检测到抗VirB9蛋白抗体,抗体滴度均＞1:3200,对照组小鼠体内未检测到抗VirB9蛋白抗体的存在.酶联斑点图像分析显示,用VirB9蛋白体外刺激,免疫组小鼠5×105个脾细胞中有147个细胞可以分泌IFN-γ,对照组仅有38个细胞.结论 在布鲁杆菌感染过程中,Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9具有免疫原性,能够刺激小鼠产生体液免疫反应与细胞免疫反应.
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