期刊简介
中华医学会、哈尔滨医科大学主办。本刊主要报道克山病、大骨节病、碘缺乏病、地方性氟、砷中毒、鼠疫、布鲁杆菌病、寄生虫等疾病的研究成果。主要栏目：述评、综述、专家论坛、论著、现场调查、临床医学、检测方法、卫生管理、学术争鸣、防治经验等。《中国地方病学杂志》被美国《化学文摘》、荷兰《医学文摘》、美国《剑桥科学文摘》和波兰《哥伯尼索引》收录;是中国自然科学、中国生物医学核心期刊，预防医学、卫生学类核心期刊。2008年获中华医学会优秀期刊二等奖，2010年获中华医学会优秀期刊奖。
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首页>中华地方病学杂志
- 杂志名称：中华地方病学杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中华医学会,哈尔滨医科大学
- 国际刊号：2095-4255
- 国内刊号：23-1583/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：2000年获黑龙江优秀科技期刊奖期刊收录：JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 医学文摘, 哥白尼索引(波兰), 文摘与引文数据库, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 农业与生物科学研究中心文摘, 维普收录(中)
周期型马来丝虫复合基因重组质粒和相应表达蛋白的免疫学研究
王慧；方政；徐倩；陆施娟；钱一言；徐怿琳；方浩；徐邦生
关键词：马来丝虫, 半胱氨酸蛋白酶抑制剂, 3-磷酸甘油醛脱氢酶, 复合基因, 表达蛋白, 免疫
摘要：目的 构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂/3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmCPI/BmGAPDH)复合基因重组质粒,并转染人宫颈癌细胞(Hela)进行重组蛋白表达.将重组质粒和相应表达蛋白进行免疫学研究比较,为研制新型的抗丝虫基因工程疫苗提供理论及实验依据.方法 扩增周期型马来丝虫目的编码基因.将目的基因片段和载体分别双酶切后进行连接,构建复合基因重组质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH,鉴定后转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞,进而通过RT-PCR和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株.亲和层析纯化所表达的重组蛋白并通过免疫蛋白印迹法(Western blot)对纯化的重组蛋白进行生物学鉴定.60只BALB/c小鼠分5组,每组12只,第2、4、6周分别免疫1次.磷酸盐缓冲液(PBS)对照组为注射PBS 100 μl;空质粒/CpG对照组为注射pcDNA3.1 100 μg和CpG 30 μg;复合重组质粒/CpG组为注射pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH 100 μg和CpG 30 μg;复合重组蛋白/CpG组为注射pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH复合重组蛋白50 μg和CpG 30 μg;复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组前2次注射pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH 100 μg和CpG 30 μg;后1次注射pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH复合重组蛋白50 μg和CpG 30 μg.用RT-PCR方法检测肌肉组织内目的基因;用酶联免疫吸附试验(ELISA)、特异性增殖试验(MTT法)分别检测免疫小鼠血清抗体效价、T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-4水平.结果 复合重组质粒pcDNA3.1 (+)-BmCPI/BmGAPDH免疫小鼠后,从小鼠肌肉组织扩增出目的基因.复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组小鼠免疫4、6周后血清抗体效价(1 695.12±1.43、3 199.63±1.34)均高于复合重组质粒/CpG组(712.69±1.08、1 510.08±1.43,P均＜0.05)和复合重组蛋白/CpG组(800.02±1.34、1 510.08±1.43,P均＜0.05);第6周的复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组小鼠淋巴细胞刺激增殖指数(1.629±0.235)高于复合重组蛋白组(1.248±0.110,P＜0.05);免疫4、6周后,复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组和复合重组质粒/CpG组小鼠血清IFN-γ水平[(101.660±5.101)、(178.265±7.139)mg/L,(102.067±3.722)、(115.148±6.031)mg/L]均高于复合重组蛋白组[(75.438±2.102)、(82.004±3.777) mg/L,P均＜0.05];免疫后6周,复合重组质粒/复合重组蛋白/CpG组和复合重组蛋白/CpG组的小鼠血清IL-4水平[(75.385±3.318)、(46.363±3.672)mg/L]均明显高于复合重组质粒/CpG组[(36.691±3.443)mg/L,P均＜0.05).结论 pcDNA3.1-BmCPI/BmGAPDH核酸疫苗和相应蛋白疫苗均可诱导BALB/c小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答反应.核酸疫苗-蛋白疫苗联合免疫效果有明显的优势.
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